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耗材常說的無熱原、無核酶、無內(nèi)毒素究竟是什麽意思

不知道(dào)大(dà)家(jiā)平時(shí)有(yǒu)沒有(yǒu)經常采購耗材的需求,如果是經常采購實驗室耗材的人(rén)可(kě)能會(huì)發現,各個(gè)廠家(jiā)可(kě)能都會(huì)給産品标榜上(shàng)無酶無熱原、無內(nèi)毒素的标簽,
特别是涉及到一些(xiē)細胞生(shēng)物學和(hé)分析生(shēng)物學的耗材更是如此,例如常見的15ml和(hé)50ml離心管、細胞培養瓶、細胞培養皿、細胞培養闆、凍存管、PCR闆等
等産品。而有(yǒu)這些(xiē)描述的産品通(tōng)常可(kě)能也會(huì)比普通(tōng)的同類産品貴一些(xiē)。那(nà)麽這些(xiē)說法到底是什麽意思,又對我們的實驗有(yǒu)什麽影(yǐng)響呢?我們
平時(shí)在進行(xíng)采購的時(shí)候應該如何進行(xíng)選擇,這裏就給大(dà)家(jiā)簡單介紹下。




定義


1


熱原


熱原指注入機體(tǐ)後能引起人(rén)體(tǐ)體(tǐ)溫異常升高(gāo)的緻熱物質。廣義的熱原包括細菌性熱原、內(nèi)源性高(gāo)分子熱原、內(nèi)源性低(dī)分子熱原及化學熱原等。這裏所指的
“熱原”,主要是指細菌性熱原,是某些(xiē)微生(shēng)物的代謝産物、細菌屍體(tǐ)及內(nèi)毒素。




2



酶大(dà)家(jiā)在初中就學過,作(zuò)為(wèi)一種生(shēng)物催化劑,酶能夠高(gāo)效催化我們生(shēng)物體(tǐ)內(nèi)各種生(shēng)化反應的進行(xíng)。然而大(dà)部分産品所說的無酶,實際上(shàng)更準确點說并不是指
所有(yǒu)酶,而是指核酸酶,很(hěn)多(duō)廠家(jiā)也寫成DNase-free和(hé)RNase-free,都是代表的一個(gè)意思。核酸酶能夠分解核酸分子,有(yǒu)專一性降解DNA或RNA,也有(yǒu)專
一性較低(dī)可(kě)同時(shí)作(zuò)用于DNA和(hé)RNA分子的酶。




3


內(nèi)毒素


內(nèi)毒素為(wèi)革蘭氏陰性菌的菌體(tǐ)中存在的毒性物質的總稱。是多(duō)種革蘭氏陰性菌的細胞壁成分,由菌體(tǐ)裂解後釋出的毒素,成分為(wèi)脂多(duō)糖。一般認為(wèi)內(nèi)毒素為(wèi)熱
原的一種,藥品生(shēng)産的時(shí)候通(tōng)常可(kě)以接受:不存在內(nèi)毒素則不存在熱原,因此在生(shēng)産的時(shí)候可(kě)能隻進行(xíng)內(nèi)毒素檢測而不進行(xíng)熱原檢測。








影(yǐng)響






熱原和(hé)內(nèi)毒素能夠刺激機體(tǐ),引起機體(tǐ)發熱。在制(zhì)藥、臨床等領域,為(wèi)了人(rén)的安全,通(tōng)常對熱原和(hé)內(nèi)毒素的量有(yǒu)所要求。在中國藥典中對于熱原和(hé)內(nèi)毒素的檢
測也都給到了明(míng)确的方法。而核酸酶在涉及到分子學實驗室的時(shí)候,因為(wèi)其具有(yǒu)分解DNA的作(zuò)用,很(hěn)可(kě)能使目标分子片段被降解,例如PCR實驗中,如果收到
核酸酶的污染有(yǒu)可(kě)能無CT值,從而産生(shēng)假陽性的結果。所以像吸頭、PCR相關的耗材通(tōng)常都是無核酸酶的。




關于熱原和(hé)內(nèi)毒素的檢測




下面簡單介紹下藥典中對熱原和(hé)內(nèi)毒素檢測的內(nèi)容。




1


熱原檢測


中國藥典1142通(tōng)則中描述了使用家(jiā)兔法進行(xíng)熱原檢測。使用健康合格的家(jiā)兔,将一定劑量的供試品,靜脈注入家(jiā)兔體(tǐ)內(nèi),在規定時(shí)間(jiān)內(nèi),觀察家(jiā)兔體(tǐ)溫升高(gāo)的
情況。與供試品接觸的試驗用器(qì)皿應無菌、無熱原。去除熱原通(tōng)常釆用幹熱滅菌法(250℃、30分鍾以上(shàng)),也可(kě)用其他适宜的方法。如果受試的家(jiā)兔在一定
時(shí)間(jiān)內(nèi)的體(tǐ)溫升高(gāo)到一定标準,則認為(wèi)供試品的熱原檢查不符合規定。




2


內(nèi)毒素檢測


內(nèi)毒素檢測以前國際上(shàng)都使用鲎試劑法進行(xíng)檢測。具體(tǐ)方法有(yǒu)凝膠法和(hé)光度測定法,鲎試劑可(kě)以與細菌內(nèi)毒素發生(shēng)凝集反應,産生(shēng)凝膠或者發生(shēng)濁度變化,通(tōng)過測
定這種變化測定內(nèi)毒素含量。鲎試劑是從海洋節肢動物鲎的血液中提取制(zhì)成的一種試劑,因此鲎在世界範圍內(nèi)遭到大(dà)量捕殺,在我國也成為(wèi)了國家(jiā)二級保護動物。
目前FDA已經批準了重組C因子法,替代了鲎試劑。我國藥典的指導原則中也已提到該法。








如何進行(xíng)選擇






其實了解了這幾個(gè)概念之後如何進行(xíng)選擇也就不難了。主要還(hái)是根據自己的需求來(lái)選擇。通(tōng)常無酶和(hé)熱原的耗材較為(wèi)常見,無內(nèi)毒素的産品相對較少(shǎo)。如果實驗
本身對于這些(xiē)沒有(yǒu)較高(gāo)要求,其實可(kě)以選用普通(tōng)耗材,舉個(gè)例子在做(zuò)離心的時(shí)候,如果是離心細胞或者相關成分最好選用無酶和(hé)熱原的離心管,而如果隻是普通(tōng)
的液體(tǐ)離心實際上(shàng)普通(tōng)離心管即可(kě)。




另外這也是很(hěn)多(duō)使用者會(huì)産生(shēng)的問題,就是在向一些(xiē)商家(jiā)采購離心管的時(shí)候會(huì)問該離心管能否重複使用,這個(gè)問題實際上(shàng)要因情況而議,因為(wèi)離心管在使用過一
次之後就已經在一定程度上(shàng)被污染了,而且即使進行(xíng)壓力蒸汽滅菌也無法完全消除這些(xiē)污染,因此再次使用的話(huà)需要看使用者自己對實驗的需求了。




歸根結底,所有(yǒu)的産品都是為(wèi)實驗者和(hé)實驗服務,不能因為(wèi)産品而影(yǐng)響自己的實驗,而是需要根據自己的實驗去選擇合适的和(hé)産品即可(kě)。


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