八十年代集單克隆抗體(tǐ)、熒光化學、激光、計(jì)算(suàn)機等高(gāo)技(jì)術(shù)發展起來(lái)的一種先進儀器(qì)，已廣泛應用于免疫學、生(shēng)物化學、生(shēng)物學、腫瘤學以及血液學等方面的研究和(hé)臨床常規工作(zuò)。其中檢測人(rén)白細胞表面标志(zhì)可(kě)對白血病、淋巴瘤作(zuò)用迅速正确的診斷，對淋巴細胞群和(hé)亞群進行(xíng)精确分類，還(hái)能分離純化某一群或亞群細胞。

活細胞免疫熒光技(jì)術(shù)是用于FCM檢測的标本準備，染色後也能在熒光顯微鏡下進行(xíng)觀察，在某些(xiē)實驗條件下，活細胞免疫熒光染色後的特異性和(hé)敏感性要優于滴片固定的常規間(jiān)接免疫熒光的結果。

活細胞表面保留有(yǒu)較完整的抗原或受體(tǐ)，先用特異性鼠源性單克隆抗體(tǐ)與細胞表面相應抗原結合，再用熒光标記的第二抗體(tǐ)結合，根據所測定的熒光強度和(hé)陽性百分率即可(kě)知相應抗原的密度和(hé)分布。

1.各種特異性單克隆抗體(tǐ)。

2.熒光标記的羊抗鼠或兔抗鼠第二抗體(tǐ)，滅活正常兔血清(見附錄)。

3.10％ FCS RPMI 1640, DPBS、洗滌液、固定液。

4.流式細胞管、EP管、移液器(qì)、離心機、熒光顯微鏡等。

制(zhì)備活性高(gāo)的細胞懸液(培養細胞系、外周血單個(gè)核細胞、胸腺細胞、脾細胞等均可(kě)用于本法)

5×106～１×107/mL
取40μL細胞懸液加入預先有(yǒu)特異性McAb(5～50μL)的小(xiǎo)玻璃管或塑料離心管，再加50μL1∶20(用DPBS稀釋)滅活正常兔血清

（4℃ 30min）

用洗滌液洗滌2次，每次加洗滌液2mL左右

1000rpm×5min
棄上(shàng)清，加入50μL工作(zuò)濃度的羊抗鼠(或兔抗鼠)熒光标記物，充分振搖

（4℃ 30min）

用洗滌液洗滌2次，每次加液2mL左右

1000rpm×5min
加适量固定液(如為(wèi)FCM制(zhì)備标本，一般加入1mL固定液，如制(zhì)片後在熒光顯微鏡下觀察，視(shì)細胞濃度加入100～500μL固定液)

FCM檢測或制(zhì)片後熒光顯微鏡下觀察

(标本在試管中可(kě)保存5～7天)

附錄:

1. DPBS (×10, 貯存液)

NaCl：80g

KCl：2g  蒸餾水(shuǐ)加至1000mL

Na2HPO4：11.5g  臨用時(shí)用蒸餾水(shuǐ)1∶10稀釋

KH2PO4：2g

2.洗滌液

DPBS：900mL

FCS：50mL (終濃度5％)

4％NaN3：50mL (終濃度0.2％)

3.固定液

DPBS：1000mL

葡萄糖：20g (終濃度2％)

甲醛：10mL

NaN3：0.2g (終濃度0.02％)