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細胞培養——無菌操作(zuò)技(jì)術(shù)

在我們生(shēng)活的環境中微生(shēng)物可(kě)以說是無處不在,而微生(shēng)物實驗,特别是各類動植物細胞培養,當我們的樣本被某種其他微生(shēng)物沾染,發現的早或許還(hái)有(yǒu)補救,但(dàn)操作(zuò)起來(lái)也比較繁瑣,并且處理(lǐ)過程還(hái)需要避免二次污染,這操作(zuò)難度可(kě)想而知了。倘若發現的稍微晚了一些(xiē),該樣本就隻能屍骨無存了,作(zuò)廢處理(lǐ)。


因此對于細胞培養成功操作(zuò)最基本的要點是:任何與細胞接觸的物品必須是無菌的。無菌技(jì)術(shù)在理(lǐ)論上(shàng)是很(hěn)簡單的:阻止無菌的、未被污染的物質或物品與任何有(yǒu)菌的、被污染的物體(tǐ)相接觸。任何直接或間(jiān)接地與培養相接觸的物品必須無菌。理(lǐ)想化的情況是所有(yǒu)無菌操作(zuò)都應該在一個(gè)層流式超淨台中進行(xíng)。



保證無菌操作(zuò)中需用到的洗手液、75%乙醇、95%乙醇、實驗室工作(zuò)服、手術(shù)用乳膠手套。




無菌操作(zuò)前用洗手液充分刷洗手。不同的需求選擇适當的實驗工作(zuò)服。為(wèi)保證無菌條件,穿好實驗服,戴乳膠手套後還(hái)需在實驗開(kāi)始前以及無菌操作(zuò)過程中,還(hái)應經常地用75%酒精消毒戴着手套的雙手。


實驗完成後脫掉防護手套後徹底沖洗雙手。

細胞培養實驗中樣品處理(lǐ)的全過程都應該在一個(gè)潔淨的工作(zuò)間(jiān)內(nèi)進行(xíng)。層流式潔淨間(jiān)為(wèi)無菌操作(zuò)提供了一個(gè)最适的可(kě)控制(zhì)環境。對将參與無菌操作(zuò)的各種物品的工作(zuò)區(qū)域要進行(xíng)清潔。


使用前後要用75%乙醇、紫外輻射或其他途徑處理(lǐ)工作(zuò)面。

無論怎樣,當所用物品介入潔淨工作(zuò)間(jiān)時(shí)都要用消毒劑處理(lǐ)。按照從潔淨到污物的順序合理(lǐ)安排各種物品,以防污染物件對清潔物件的交叉污染。任何細小(xiǎo)的污染物應立即投入到消毒盤內(nèi)。


無菌工作(zuò)完成後,及時(shí)清理(lǐ)各種較大(dà)的污物或其他要想處理(lǐ)的廢棄物,并放置在指定的包裝袋或盤內(nèi),然後高(gāo)壓滅菌。

與相關物品接觸的器(qì)械的關鍵部分浸泡于95%乙醇中。從乙醇中小(xiǎo)心取出器(qì)械時(shí),切勿碰觸其潔淨部位。待乙醇自然揮發後,持器(qì)械在噴燈火(huǒ)焰上(shàng)通(tōng)過,去除殘留的乙醇。


器(qì)械使用前,切勿碰觸任何未經消毒的物件,冷卻10s 後再用。


警告:

1

75%、95%乙醇都是是易燃品,乙醇容器(qì)要置于一定範圍的安全處而遠離明(míng)火(huǒ)。

2

器(qì)械使用完畢後重新浸泡在乙醇消毒劑中,以備使用。

3

手握接種環柄,于中間(jiān)部位開(kāi)始在酒精燈火(huǒ)焰上(shàng)前後移動燒灼金屬圈,直至出現橘紅色,然後冷卻至室溫(約10s) ,待用。

4

完成接種後,重新燒灼接種圈,清除殘餘的生(shēng)物活性物質。冷卻至室溫,放置備用。


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