核酸提取—瓷珠法
核酸是生(shēng)物界一類非常重要的生(shēng)物大(dà)分子。它在生(shēng)物繁殖、發育、維持、衰老和(hé)死亡等所有(yǒu)生(shēng)命活動中發揮着重要作(zuò)用。目前，核酸已成為(wèi)生(shēng)物化學、遺傳學等生(shēng)命相關學科的研究熱點。核酸研究的首要前提是能夠将其從衆多(duō)複雜的生(shēng)物大(dà)分子中提取出來(lái)，并進行(xíng)一定程度的純化，以供相應的科學研究和(hé)實際應用。
實驗原理(lǐ) 在帶電(diàn)荷的鹽離子（如Na+）的作(zuò)用下，帶負電(diàn)荷的磷酸基團在解離的鹽離子和(hé)羧基之間(jiān)形成離子橋，使DNA特異性地吸附在羧基磁珠表面。在去除PEG和(hé)鹽後，添加水(shuǐ)性分子将快速充分地水(shuǐ)化DNA，解除三者之間(jiān)的離子相互作(zuò)用，使吸附在磁珠上(shàng)的DNA被提取出來(lái)。
實驗步驟 01 配置蛋白酶K溶液 按照配置比例在一定量蛋白酶K幹粉中加入一定量的去離子水(shuǐ)，然後進行(xíng)瞬時(shí)離心或者反複搖晃震蕩使其完全溶解。短(duǎn)期使用可(kě)于4℃保存，長期儲存需置于-20℃。 02 樣本裂解 使用移液槍将樣本加入離心管中，并且加入裂解緩沖液以及蛋白酶K溶液。然後再加入結合緩沖液，其中包含了磁珠用于吸附DNA。反複震蕩混勻，使樣本裂解且DNA結合在磁珠上(shàng)。 03 磁鐵(tiě)吸附 将離心管放置在磁力架上(shàng)，使磁珠被磁鐵(tiě)吸附到離心管的管壁上(shàng)，然後用移液槍吸附上(shàng)清并棄去，保留磁珠。 04 洗脫DNA 用移液槍在離心管中加入洗滌緩沖液，并且反複搖晃震蕩使磁珠重新懸浮，然後将離心管放置在磁力架上(shàng)，吸附磁鐵(tiě)，吸取上(shàng)清并棄去。重複洗滌兩次，用移液槍移取上(shàng)清液于另一離心管中，此時(shí)上(shàng)清液裏即為(wèi)DNA。 05 其他提取法 以上(shàng)操作(zuò)為(wèi)手動提取，除此之外還(hái)可(kě)以選擇使用核酸提取儀進行(xíng)DNA提取。大(dà)緻操作(zuò)步驟為(wèi)：将第2步中經過裂解緩沖液以及蛋白酶K溶液處理(lǐ)過的樣本加入深孔闆當中，然後将深孔闆放進提取儀，配合磁棒套自動完成DNA提取過程。
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